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metadata.dc.type: Dissertação
Title: CARACTERIZAÇÃO GÉNETICA DE POPULAÇÕES DE Heterodera glycines DE MUNICÍPIOS DA REGIÃO DA ESTRADA DE FERRO NO ESTADO DE GOIÁS
metadata.dc.creator: Moreira, Janaina Alves de Almeida
metadata.dc.contributor.advisor1: Araujo, Fernando Godinho de
metadata.dc.contributor.referee1: Araujo, Fernando Godinho de
metadata.dc.contributor.referee2: Silveira, Ricardo Diógenes Dias
metadata.dc.contributor.referee3: Figueiredo, Adriana
metadata.dc.description.resumo: O Heterodera glycines, também conhecido como Nematoide de Cisto da Soja (NCS), desde sua detecção no Brasil na safra 1991/1992, vem se configurando entre os problemas fitossanitários que dificultam a obtenção de elevados rendimentos na cultura da soja (Glycine max), devido a sua capacidade de disseminação e a elevada variabilidade de raças fisiológicas. Identificar corretamente a raça fisiológica desse nematoide presente na área de cultivo é o primeiro passo para o emprego correto e seguro das cultivares resistentes, a fim de evitar a pressão de seleção de novas raças. Diante dessa problemática, objetivo do presente estudo foi a caracterização genética, de populações de Heterodera glycines provenientes de municípios produtores de soja, da região da Estrada de Ferro (estado de Goiás) em raças e também a caracterização molecular empregando marcadores de RAPD. Os estudos foram conduzidos no IF Goiano – campus Urutaí, em Urutaí – GO. Inicialmente foram realizadas coletas de amostras de solo (em áreas comerciais de cultivo de soja) nos municípios da região da Estrada de Ferro e posteriormente, análise nematológica para confirmar a presença do NCS no inóculo a ser multiplicado em casa de vegetação. Para o teste de raça, o experimento foi arranjado em DIC com 30 (populações do NCS) x 6 (diferenciadoras de soja) com dez repetições. As sementes das diferenciadoras de soja (Pickett, Peking, PI88788, PI90763, Hartwig e Lee) foram pré-germinadas em bandejas células. No momento do transplantio dessas diferenciadoras para tubetes (contendo apenas areia autoclavada), realizou-se a inoculação (4000 ovos e juvenis de segundo estádio) de cada população do NCS. Trinta dias após a inoculação foi avaliado o número de fêmeas sobre cada diferenciadora para calcular o índice de fêmeas (IF%) de acordo com a metodologia de Riggs & Schmitt (1988). Para a caracterização molecular, utilizou-se 28 primers RAPD e a extração de DNA foi realizada pelo método CTAB 2%. A seguir, quantificou o DNA através de comparações visuais das bandas geradas em gel de agarose (0,8%) corado com brometo etídio (0,5 mgL-1). As reações de RAPD foram montadas para um volume final de 25 µL, compostas de 10mM Tris-HCL (pH 8,3), 50 mM KCl, 2,4 mM de MgCl2, 100 µM de cada deoxiribonucleotídeo, 0,4 µM do “primer”, 1 U de enzima Taq DNA polimerase, e 30 ng de DNA. As reações de PCR foram feitas em termociclador e os produtos amplificados foram separados por eletroforese horizontal, em gel de agarose 1,2% contendo brometo de etídio, e submerso em tampão TBE (0,09 M Tris-Borato; 0,002 M EDTA). Os dados de RAPDs obtidos foram avaliados de forma binária, atribuindo valores de (1) para presença e (0) ausência da banda amplificada para cada primer. A matriz binária foi usada para estimar a distância genética entre as populações com base na dissimilaridade de Jaccard. A análise de agrupamento com base na matriz de dissimilaridade genética calculada foi obtida pelo método de Ward utilizando o programa estatístico R versão 3.0.3. Foram encontradas 9 raças fisiológicas distintas de Heterodera glycines em municípios da região da Estrada de Ferro (Estado de Goiás). No município de Orizona, foram constatadas as raças 3, 6, 9 e 10. Em Vianópolis as raças encontradas foram a 3 e 10. Já em Silvânia e Leopoldo de Bulhões, detectou-se as raças 3 e 1 em ambos municípios. As raças 3, 4+, 6, 10 e 14+ foram detectadas em Ipameri. Em Campo Alegre de Goiás identificou as raças 6, 13, e 14. Já em Gameleira de Goiás e Catalão, detectou apenas a raça 3. Dos 28 primers RAPD, apenas 10 foram polimórficos entre as populações do NCS e o restante não amplificaram ou tiveram baixa amplificação do fragmento de DNA. O uso de marcadores RAPD permitiu verificar diferenças no conjunto gênico que compõe diferentes raças do Heterodera glycines. Foram obtidos cinco grupos geneticamente distintos entre os acessos populacionais de H. glycines provenientes de municípios da região da Estrada de Ferro, cuja variabilidade genética entre eles foi elevada.
Abstract: Heterodera glycines, also known as Soybean Cyst Nematode (SCN), since it is detected in Brazil in the 1991/1992 crop, has been confusing among the phytosanitary problems that make it difficult to obtain high yields in soybean (Glycine max) due to their capacity of dissemination and the high variability of physiological races. To correctly identify the physiological race of this nematode present in the cultivation area is the first step for the correct and safe use of the resistant cultivars in order to avoid the selection pressure of new breeds. In view of this problem, the objective of the present study was the genetic characterization of populations of Heterodera glycines from soybean producing municipalities of the region of the Estrada de Ferro (state of Goiás) in races and also the molecular characterization employing RAPD markers. The studies were conducted at the Goiano IF - Urutaí campus, in Urutaí - GO. Soil samples (in soybean commercial areas) were collected in the municipalities of the region of the Estrada de Ferro and later, a nematological analysis was performed to confirm the presence of NCS in the inoculum to be multiplied in a greenhouse. For the race test, the experiment was arranged in DIC with 30 (NCS) populations x 6 (soybean differentiators) with ten replicates. The seeds of the soybean differentiators (Pickett, Peking, PI88788, PI90763, Hartwig and Lee) were pre-germinated in cell trays. At the moment of the transplanting of these differentiators for tubes (containing only autoclaved sand), inoculation (4000 eggs and juveniles of second stage) of each SCN population was carried out. Thirty days after inoculation, the number of females on each differentiator was calculated to calculate the female index according to the methodology of Riggs & Schmitt (1988). For the molecular characterization, 28 RAPD primers were used and DNA extraction was performed by the 2% CTAB method. It then quantified the DNA by visual comparisons of bands generated on agarose gel (0.8%) stained with ethidium bromide (0.5 mgL-1). The RAPD reactions were assembled to a final volume of 25 μl, composed of 10 mM Tris-HCL (pH 8.3), 50 mM KCl, 2.4 mM MgCl 2, 100 μM of each deoxyribonucleotide, 0.4 μM of the " primer ", 1 U of Taq DNA polymerase enzyme, and 30 ng of DNA. PCR reactions were done in a thermal cycler and the amplified products were separated by horizontal electrophoresis, 1.2% agarose gel containing ethidium bromide, and submerged in TBE buffer (0.09 M Tris-Borate, 0.002 M EDTA). The RAPD data obtained were evaluated binary, assigning values of (1) for presence and (0) absence of the amplified band for each primer. The binary matrix was used to estimate the genetic distance between populations based on Jaccard dissimilarity. The clustering analysis based on the calculated genetic dissimilarity matrix was obtained by the Ward method using the statistical program R version 3.0.3. There were found 9 distinct physiological races of Heterodera glycines in municipalities of the region of the Estrada de Ferro (State of Goiás). In the municipality of Orizona, races 3, 6, 9 and 10 were found. In Vianópolis, races 3 and 10 were found. In Silvânia and Leopoldo de Bulhões, races 3 and 1 were detected in both municipalities. Races 3, 4+, 6, 10 and 14+ were detected in Ipameri. In Campo Alegre de Goiás, he identified races 6, 13 and 14. In Gameleira de Goiás and Catalão, he detected only race 3. Of the 28 RAPD primers, only 10 were polymorphic among the NCS populations and the rest did not amplify or have had low amplification of the DNA fragment. The use of RAPD markers allowed to verify differences in the gene pool that compose different breeds of Heterodera glycines. Five genetically distinct groups were obtained among the population accesses of Heterodera glycines from municipalities of the region of the Railroad, whose genetic variability among them was high.
Keywords: nematoide de cisto da soja
marcadores de RAPD
polimorfismo
teste de raça
metadata.dc.subject.cnpq: CIENCIAS AGRARIAS
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Instituto Federal Goiano
metadata.dc.publisher.initials: IF Goiano
metadata.dc.publisher.department: Campus Urutaí
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Proteção de Plantas
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
URI: https://repositorio.ifgoiano.edu.br/handle/prefix/309
Issue Date: 27-Feb-2018
Appears in Collections:Mestrado em Proteção de Plantas

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