Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://repositorio.ifgoiano.edu.br/handle/prefix/282
Tipo: Dissertação
Título: ANÁLISE FUNCIONAL DO GENE CODIFICADOR DE UMA N-ACETIL-Β-DGLICOSAMINIDASE (NAG1) DE TRICHODERMA HARZIANUM
Autor(es): Mendes, Vanessa
Primeiro Orientador: Vieira, Pabline Marinho
Primeiro Membro da Banca: Vieira, Pabline Marinho
Segundo Membro da Banca: Ulho, Cirano José
Terceiro Membro da Banca: Araújo, Fernando Godinho de
Resumo: O sistema quitinolítico de Trichoderma spp. é composto pelas enzimas quitinases e N-acetil-βD-glicosaminidases (NAGases). Estas podem estar relacionadas com processos de remodelação de parede celular fúngica e degradação da quitina de fitopatógenos durante o biocontrole. Neste trabalho foi realizada a clonagem do gene codificador de uma N-acetil-β-D-glicosaminidase (NAG1) e sua superexpressão em Trichoderma harzianum. Para isso, foi construído um vetor de superexpressão contendo o referido gene (nag1) sob controle de um promotor constitutivo e realizada a transformação genética de T. harzianum via biobalística. Três transformantes foram caracterizados em análises moleculares e atividade enzimática, sendo confirmadas a inserção do vetor e a expressão constitutiva do gene. Os bioensaios de crescimento revelaram que a superexpressão de nag1 em T. harzianum reduziu o crescimento dos transformantes e atividade antagonista dos fitopatógenos R. solani e S. sclerotirum. Em análise por microscopia eletrônica de fluorescência foi detectado que os transformantes contendo cópia única do gene apresentaram espessamento da parede celular e diminuição da largura das hifas. E ainda, a análise de expressão por PCR em tempo real revelou que os transformantes exibiram uma maior expressão dos genes de micoparasitismo, tanto em condições controle quanto em confronto com fitopatógeno. Dessa maneira, foi possível observar que a superexpressão de nag1 interferiu no processo de remodelação de parede celular em T. harzianum e na atividade antagonista de fitopatógenos.
Abstract: The chitinolytic system of Trichoderma spp. is composed by the enzymes chitinases and Nacetyl-β-D-glucosaminidases (NAGases). These may be relate to processes of fungal cell wall remodeling and phytopathogenic chitin degradation during biocontrol. In this work was performed the cloning of the gene encoding an N-acetyl-β-D-glucosaminidase (NAG1) and its overexpression in Trichoderma harzianum. For this, an overexpression vector containing the gene (NAG1) was construct under the control of a constitutive promoter and was performed the genetic transformation of T. harzianum via biobalistic. Three transformants were characterize in molecular analyses and enzymatic activity, confirming the insertion of the vector and the constitutive expression of the gene. Growth bioassays revealed that NAG1 overexpression in T. harzianum reduced the growth of the transformants and antagonistic activity of the phytopathogens Rhizoctonia solani and Sclerotinia sclerotirum. Fluorescence microscopy analysis revealed that transformants containing single copy of the gene showed thickening of the cell wall and decreased hyphae width. Furthermore, the expression analysis by real-time PCR revealed that the transformants exhibited a greater expression of mycoparasitism genes, both under control and in phytopathogenic conditions. Thus, it was possible to observe that the overexpression of NAG1 interfered the T. harzianum cellular wall remodeling process and in phytopathogen antagonist activity.
Palavras-chave: Enzima quitinolítica
Micoparasitismo
Fitopatógeno
Microscopia eletrônica de fluorescência
Parede celular
Área do CNPq: CIENCIAS AGRARIAS
Idioma: por
Pais: Brasil
Editor: Instituto Federal Goiano
Sigla da Instituição: IF Goiano
Campus: Campus Urutaí
Programa/Curso: Programa de Pós-Graduação em Proteção de Plantas
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: https://repositorio.ifgoiano.edu.br/handle/prefix/282
Data do documento: 15-Mai-2017
Aparece nas coleções:Mestrado em Proteção de Plantas

Arquivos associados a este item:
Arquivo Descrição TamanhoFormato 
Dissertação_Proteção de plantas_Vanessa Mendes.pdf1,27 MBAdobe PDFVisualizar/Abrir


Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.