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metadata.dc.type: Dissertação
Title: CRISPR/Cas9 para obtenção de Trichoderma harzianum com marcas de seleção
Other Titles: Generation of Trichoderma harzianum with pyr4 auxotrophic marker by using CRISPR/Cas9 system
metadata.dc.creator: Vieira, Amanda Aurélio
metadata.dc.contributor.advisor1: Vieira, Pabline Marinho
metadata.dc.description.resumo: Trichoderma harzianum é um fungo filamentoso de controle biológico de pragas agrícolas. Os genes desse microrganismo têm sido mundialmente estudados e suas aplicações são patenteadas para uso em biofungicidas e em estratégias de melhoramento genético de plantas. Entretanto, a tecnologia de edição genômica ainda não foi reportada nessa espécie. Este trabalho registra a obtenção de mutantes com marcas de seleção nessa espécie através da técnica CRISPR/Cas9. Para isso, foi realizada a inserção do RNA-guia e Cas9 via biobalística, e o sequenciamento de pyr4 nesses mutantes comprovou mutações (deleções e inserções) na região alvo do gene pyr4. A caracterização fenotípica demonstrou um atraso no crescimento dos mutantes na ausência de uridina, bem como, resistência ao ácido 5-fluorótico; além do nocaute gênico não interferir na atividade de micoparasitismo dos fitopatógenos Sclerotina sclerotiorum e Fusarium oxysporum. Dessa forma, foi possível demonstrar mutação do gene pyr4 em T. harzianum com o uso da técnica CRISPR/Cas9 sem a necessidade de recombinação homóloga, e que a expressão endógena do sistema não interfere no controle biológico deste fungo. Este trabalho apresenta o primeiro relato para esta técnica nessa espécie de biocontrole e, os mutantes expressando Cas9, representam potencial biotecnológico para validação e patenteamento de genes em biotecnologia agrícola.
Abstract: Trichoderma harzianum is a filamentous fungus used as a biological control agent for agricultural pests. Genes of this microorganism have been studied and their applications are patented for use in biofungicides and plant breeding strategies. Gene editing technologies would be of great importance for genetic characterization of this species and has not yet been reported. This work registers obtaining of mutants with selection marks in this species using the CRISPR/Cas9 system. For this, sequences for a guide RNA and Cas9 overexpression were inserted via biobalistics, and the sequencing approach proved mutants deletions and insertions at pyr4 gene. Phenotypic characterization demonstrated a reduction in the growth of mutants in the absence of uridine, as well as resistance to 5-fluorotic acid; besides the gene disruption did not reduce mycoparasitc activity against phytopathogens. Thus, it was possible to demonstrate target disruption of pyr4 gene in T. harzianum using the CRISPR/Cas9 system and also that endogenous expression of the system did not interfere with the biological control activity of pathogens. This work is the first report for this technique in this species of biocontrol and, the mutants expressing Cas9, represent biotechnological potential for generation of useful technologies in agricultural biotechnology.
Keywords: Controle biológico; edição gênica, fitopatógeno, micoparasitismo, pyr4
biocontrol; phytopathogen; pyr4; gene editing; mycoparasitism
metadata.dc.subject.cnpq: Ciências Agrárias e Ciências Biológicas
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Instituto Federal Goiano
metadata.dc.publisher.initials: IF Goiano
metadata.dc.publisher.department: Campus Urutaí
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Proteção de Plantas
metadata.dc.rights: Acesso Restrito
URI: https://repositorio.ifgoiano.edu.br/handle/prefix/1210
Issue Date: 25-Mar-2020
Appears in Collections:Mestrado em Proteção de Plantas

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[AmandaVieira] Dissertação_FINAL.pdfVersão final da Dissertação da Discente, Amanda Aurélio Vieira, do PPGPP- IFGoiano/Campus Urutaí1 MBAdobe PDFView/Open


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